PCR实验也能翻车?这些方法来解决
聚合酶链式反应(PCR)是分子生物学的基础实验技术之一,但如果忽略了其中的一些要点,即使是实验室里的大神,也会遇到目的序列扩增不出的情况。PCR 的成功与否与模板、引物、DNA 聚合酶及其他反应组分、反应条件这四大要素紧密相关,今天我们就一起梳理下 PCR 失败的主要原因和对策吧!
PCR成功的四大要素及注意事项
1
模板(点击下方文字展开查看解决方案)
2
引物(点击下方文字展开查看解决方案)
3
DNA聚合酶及其他反应组分
(点击下方文字展开查看解决方案)
4
反应条件(点击下方文字展开查看解决方案)
可见在一个成功的 PCR 实验里,模板、引物、DNA 聚合酶、反应条件这四个要素缺一不可,尤其对于一些保真度要求高的长片段、或是一些高 GC 含量的复杂模板,选择一款合适的 DNA 聚合酶又起到至关重要的作用。
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模板普适性:能够识别不同物种、30%~80%GC含量的DNA片段。
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延伸力强:可扩增长至 20 kb 的 DNA 片段。
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高灵敏度:基因组模板用量可低至 1 ng。
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操作简便:只需加入模板和引物,轻松配好体系,PCR 产物平末端,纯化后可直接用于无缝克隆。
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参考文献
Zhao Z., Xie X., Liu W., Huang J., Tan J., Yu H., Zong W., Tang J., Zhao Y., Xue Y., Chu Z., Chen L., and Liu Y.-G. (2022). STI PCR: an efficient method for amplification and de novo synthesis of long DNA sequences. Mol. Plant. doi: https://doi.org/10.1016/j.molp.2021.12.018.